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細胞培養(yǎng)基的分類與選擇技術總結
點擊次數(shù):1023 更新時間:2020-06-19

培養(yǎng)基是用來供給細胞營養(yǎng),促使細胞增殖的,也是細胞賴以生長的環(huán)境。細胞培養(yǎng)實驗中用量多的就是細胞培養(yǎng)基,雖然細胞培養(yǎng)試驗基本技術大同小異,但是每種細胞的培養(yǎng)條件卻相差甚遠。若偏離某種細胞所需的培養(yǎng)條件,則會導致細胞表達不同的表型。

 

 

培養(yǎng)基種類

按照來源分類:在動物細胞體外培養(yǎng)實驗中,可使用天然培養(yǎng)基(Natural Medium)或是合成培養(yǎng)基(Synthetic/Artificial Medium)。

天然培養(yǎng)基:源于動物體液或組織分離提取,營養(yǎng)成分豐富且各項條件與體內(nèi)環(huán)境相似,所以培養(yǎng)效果佳,但是由于來源于動物,成分復雜,且批間差較大。

合成培養(yǎng)基:是由高純度化學成分(無機鹽、氨基酸、維生素、含碳物質等)與純水配置而成,所有成分都是確定,且可知其確切含量的。

合成培養(yǎng)基根據(jù)實驗目的又可分為三種:

★ 短時間保存細胞活性

即各類平衡鹽溶液,具有特定的pH和滲透壓;能維持細胞離開生物體后幾小時內(nèi)的活性。

★ 延長細胞存活時間

即基礎培養(yǎng)基,在平衡鹽溶液中添加各種有機化合物或血清,配合適當?shù)膶嶒灢僮鳁l件,可將細胞培養(yǎng)至多代。

★ 特殊功能

即特殊培養(yǎng)基,根據(jù)實驗目的-誘導分化、增殖等要求,將基礎培養(yǎng)基額外添加各類因子的特殊培養(yǎng)基。

目前市面上合成培養(yǎng)基種類繁多且使用便利,因此合成培養(yǎng)基目前是使用guang泛的。

培養(yǎng)基一般含有氨基酸、無機鹽、維生素、含碳物質和其他營養(yǎng)元素,每種成分對于細胞存活、代謝等功能都有不同影響,不同細胞系需要的成分含量也不同,因此市面上會存在各類培養(yǎng)基配方。

培養(yǎng)基形式不同,儲存體積、價格、使用方式也各不相同。

因培養(yǎng)基種類繁多,因此,我們簡單列舉了幾種常見基礎培養(yǎng)基為大家進行介紹

1. MEM

Minimal Essential Medium是基本的培養(yǎng)基, 設計之初是為了培養(yǎng)HeLa細胞以及部分哺乳類的成纖維細胞。MEM含有12種必需氨基酸、谷氨酰胺和8種維生素,適合多種細胞單層生長。以MEM為基礎,Stanner利用Earle's Balanced Salts和非必需胺基酸(NEAA)進一步配制成MEM-Alpha培養(yǎng)基,可廣泛用于哺乳動物細胞的培養(yǎng)。

2. DMEM

Dulbecco's Modified Eagle Medium(DMEM)是目前chang使用的改良式Eagle's培養(yǎng)基。DMEM與MEM含有相同的營養(yǎng)成分,但濃度高出2~4倍。主要用于快速生長的細胞,分低糖(1000mg/L)、高糖(4500mg/L)兩種。DMEM含更高濃度的NaHCO3,要用10%的CO?來平衡,當然也可以在較低CO?濃度下使用。

DMEM-高糖(標準型)更適合高密度懸浮細胞培養(yǎng)。適用于附著性較差,但又不希望它脫離原來生長點的克隆培養(yǎng),也可用于雜交瘤中骨髓瘤細胞和DNA轉染的轉化細胞的培養(yǎng)。

DMEM-低糖(標準型)適于依賴性貼壁細胞培養(yǎng),特別適用于生長速度快、附著性較差的腫瘤細胞培養(yǎng)。

3. RPMI-1640

RPMI-1640營養(yǎng)成分比較簡單,比DMEM少一點糖和谷光甘肽,廣泛應用于許多種正常細胞和腫瘤細胞、特殊造血細胞、正?;驉盒栽錾陌准毎s交瘤細胞的培養(yǎng)。其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴細胞、T細胞淋巴瘤細胞以及HCT-15上皮細胞等均可參考使用。

4. DMEM:F12

F12培養(yǎng)基成分豐富,含有多種微量元素,和DMEM以1:1結合,稱為DMEM:F12培養(yǎng)基,作為無血清培養(yǎng)基的基礎,以利用了F12含有較豐富的成分和DMEM含有較高濃度的營養(yǎng)成分為優(yōu)點。

該培養(yǎng)基適用于血清含量較低條件下哺乳動物細胞培養(yǎng)。為了增強該培養(yǎng)基的緩沖能力,可以在DMEM:F12(1:1)中加入15mMHEPES緩沖液。

5. McCoy's 5A

McCoy's 5A Medium早是用于肉瘤細胞的培養(yǎng)所設計,可支持多種(如骨髓、皮膚、肺和脾臟等)的原代細胞的生長。除適于一般的原代細胞培養(yǎng)外,主要用于作組織活檢培養(yǎng)、一些淋巴細胞培養(yǎng)以及一些難培養(yǎng)細胞的生長支持。

6. M-199

M-199培養(yǎng)基由Morgan等人研制,是第一個具有確定化學成分的細胞培養(yǎng)液,原本是用來研究雞胚原代細胞。除BSS外,含有53種成分,為全面培養(yǎng)基,此培養(yǎng)液必須輔以血清才能支持長期培養(yǎng)。主要用于雞胚成纖維細胞培養(yǎng)。M-199可用于培養(yǎng)多種種屬來源的細胞,并能培養(yǎng)轉染的細胞,廣泛用于病毒學、疫苗生產(chǎn)。

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