避免蛋白降解:
總體規(guī)則:蛋白酶普遍存在,在提取蛋白質(zhì)的步驟中,早些抑制,經(jīng)常抑制
分裝蛋白溶液,儲(chǔ)存于不同的溫度和不同的緩沖液中,測(cè)蛋白活性,找出適儲(chǔ)存條件。
冷藏,并加入穩(wěn)定劑。這些穩(wěn)定劑一般都能充分保持蛋白的生物學(xué)活性。
將蛋白溶液儲(chǔ)于50%(V/V)的甘油或懸于硫酸銨(3.2M)中,避免凍存
冰結(jié)晶會(huì)造成物理剪切及蛋白變性。
避免酶的反復(fù)凍融,如果酶需要凍存,分裝成小管后凍存。
蛋白質(zhì)的儲(chǔ)存:
蛋白樣品在液氮中速凍,拿出后加入10-20%的甘油,長(zhǎng)期儲(chǔ)存
整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中,都要將蛋白樣品置于冰上
從母管中吸取不同的蛋白時(shí),都要用新鮮的槍頭
不要將未用的溶液倒回母管
戴手套操作,避免蛋白交叉污染,或是蛋白酶的污染
避免劇烈的震蕩,避免溶液中混入蛋白變性劑
實(shí)驗(yàn)的過程中應(yīng)避免灰塵進(jìn)入,灰塵包含60%的肌氨酸
操作過程中:
操作時(shí)總是小體積小量的操作,避免污染,并且動(dòng)作要快
a:此類蛋白酶在活性中心包含絲氨酸和組氨酸。
b:此類蛋白酶在活性中心包含半胱氨酸(巰基,-SH-)。
c:此類蛋白酶在活性中心包含金屬離子(如:n2+,Ca2+,Mn2+)。
d:此類蛋白酶在活性中心包含天冬氨酸族。
生物試劑的使用常識(shí):
(1)試劑切忌與手接觸(有些試劑有強(qiáng)腐蝕性、等特性)。
(2)要用潔凈的藥勺,量筒或滴管取用試劑,不允許用同一種工具同時(shí)連續(xù)取用多種試劑。取完一種試劑后,應(yīng)將工具洗凈(藥勺要擦干)后,才可取用另一種試劑。
(3)試劑取用后一定要將瓶塞蓋緊,不可放錯(cuò)瓶蓋和滴管,絕不允許張冠李戴,用完后請(qǐng)及時(shí)將瓶放回原處,以免遺忘,帶來不便。
(4)已取出的試劑不能再放回原試劑瓶?jī)?nèi)(怕產(chǎn)生原試劑的再次污染)。